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上海酶科生物科技有限公司

ELISA Kit,生化试剂盒,气相、高效液相代测

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丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 货到付款
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产品: 浏览次数:73丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 货到付款 
品牌: 上海酶科
产品货号: YX-C-A006
产品规格: 50管/48样;100管/96样
最小起订量: 1 盒
供货总量: 10000 盒
发货期限: 自买家付款之日起 2 天内发货
有效期至: 长期有效
最后更新: 2020-03-09 13:14
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详细信息
 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理:

PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛,添加乙醇脱氢酶(ADH)来进一步催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340nm有吸收峰,而NAD+没有;通过测定340nm光吸收下降速率,来计算PDC活性。

自备仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体×1 瓶,﹣20℃保存。

混合试剂:临用前配制,小心把试剂四转移到试剂三中,充分溶解。

试剂六:液体×1 管,4℃保存。

粗酶液提取:

1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率200W,工作3s,间歇10s,工作35次),16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

2、组织处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

PDC 测定操作:

1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到340nm,蒸馏水调零。

2.试剂二置于25℃水浴中预热30min。

3.空白管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A1和A2。

4.测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A3和A4。

注意:空白管只需测定一次。

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