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可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ALPT 在碱性环境下催化蛋白质水解，与土壤质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理：
碱性条件下，S-ALPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原菱酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。
实验中所需仪器及设备：
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水
试剂组成和配置：
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10ml蒸馏水充分溶解待用；剩余试剂4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入100uL试剂七使粉剂润湿，然后加入20ml试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂四： 粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入50ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃
保存；
试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂六：液体 1.5mL×1 支，0.05mg/ml标准酪氨酸溶液；
试剂七：液体 1.5mL×1 支，4℃保存；
测定操作：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
3、样本测定：
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试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
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风干土样（g） |
0.02 |
0.02 |
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试剂一（μL） |
100 |
300 |
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试剂三（μL） |
200 |
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混匀后，40℃水浴 30min，振荡 5-6 次，使土样与反应液充分接触 |
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试剂二（μL） |
100 |
100 |
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混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液 |
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测定管 |
对照管 |
标准管 |
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上清液（μL） |
150 |
150 |
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试剂六（μL） |
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150 |
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试剂四（μL） |
700 |
700 |
700 |
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试剂五（μL） |
150 |
150 |
150 |
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混匀，40℃水浴 20min，680nm下读取各管吸光值A
注意 ：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。