微量法
注意:正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容:
标准液:液体4mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体40mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂1瓶,-20℃避光保存,临用前加4mL试剂三溶解。
试剂三:液体40mL×1瓶,4℃保存。
产品说明:
FDA水解反应能很好的反应土壤中微生物活性和土壤质量的变化以及生态系统中质的转化,是土壤质量研究中的重要生物学指标之一。
FDA是一种无色化合物,在介质中能被许多土壤酶所催化水解,并经脱水反应,产生酶解终产物荧光素,稳定不易被分解,并在490nm处有强吸收峰,通过检测490nm处的吸光值变化可计算得FDA水解酶活性。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
操作步骤:
一、样本处理
称取风干过20目筛土壤约0.05g,备用。
二、测定操作表
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空白管 |
标准管 |
对照管 |
测定管 |
样本(g) |
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0.05 |
0.05 |
标准液(μL) |
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40 |
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双蒸水(μL) |
40 |
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试剂一(μL) |
200 |
200 |
240 |
200 |
试剂二(μL) |
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40 |
充分混匀,30℃,震荡1h |
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试剂三(mL) |
160 |
160 |
160 |
160 |
10000g,25℃,离心5min,取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板中测定490nm处吸光值A,△A1=A标准管-A空白管,△A2=A测定管-A对照管 |
注意:空白管和标准管只需测定一次。