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（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
测定原理
亚硝酸还原酶可将NO2-还原为 NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2-减少，即 540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿。
试剂的组成和配制
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 10mL 蒸馏水溶解。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。（使用前50℃加热溶解）
试剂五：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。
测定操作表
土样自然风干或35℃烘干
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空白管 |
对照管 |
测定管 |
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风干土样（g） |
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0.1 |
0.1 |
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蒸馏水（μL） |
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200 |
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试剂一（μL） |
200 |
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200 |
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试剂二（μL） |
200 |
200 |
200 |
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混匀后，25℃反应 1h |
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试剂三（μL） |
200 |
200 |
200 |
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充分震荡 30S，10000rpm，4℃，离心 10min |
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上清液（μL） |
500 |
500 |
500 |
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工作液（μL） |
1000 |
1000 |
1000 |
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充分混匀，室温静置显色10min，用蒸馏水调零，于1mL玻璃比色皿中测定540nm各管吸光值，分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管。 |
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