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可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨，土壤中的还原态化合物可作为氢的供体，其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失，间接影响氮肥的利用效率。
测定原理
硫酸铁铵中的Fe3+可将羟胺氧化为氮气，自身被还原为Fe2+，Fe2+在弱酸条件下与邻菲罗琳形成橙红色配合物，在 510nm 处有吸收峰，羟胺还原酶作用于羟胺，使配合物形成量减少，510nm处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、震荡仪、氮吹仪。
试剂组成和配制
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加10mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂六：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂七：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
测定操作表
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空白管 |
对照管 |
测定管 |
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风干土样（g） |
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0.1 |
0.1 |
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试剂一（μL） |
200 |
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200 |
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蒸馏水（μL） |
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200 |
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试剂二（μL） |
200 |
200 |
200 |
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试剂三（μL） |
600 |
600 |
600 |
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混匀后，用 N2气流排除管中空气，立即密封，于 30℃反应 1h |
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试剂四（μL） |
400 |
400 |
400 |
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充分震荡 10min，8000rpm，25℃，离心 10min |
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上清液（μL） |
100 |
100 |
100 |
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试剂五（μL） |
200 |
200 |
200 |
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试剂六（μL） |
100 |
100 |
0.1 |
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试剂七（μL） |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
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蒸馏水（μL） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
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充分混匀，25℃静置显色10min，用蒸馏水调零，于1mL 玻璃比色皿中测定510nm各管吸光值，分别记为A空白管、A标准管、A对照管、A测定管，△A＝A 空白管－（A 测定管－A 对照管）。 |
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