(Total Iron Binding Capacity,TIBC)试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力,其含量高低与缺铁性、急性肝炎等疾病的发生密切相关。
测定原理
Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物,在562nm处有特征吸收峰。碱性条件下,血清转铁蛋白可以与Fe3+结合,剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+,此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关;酸化后,转铁蛋白结合的Fe3+释放,并且进一步被还原成Fe2+,此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关。A2减A1与TIBC浓度呈正比。
自备实验用品及仪器
天平、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。(临用前根据用量将A液和B液按1:1混合)
试剂四:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
测定操作表
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对照管 |
测定管 |
血清(μL) |
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100 |
试剂一(μL) |
800 |
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试剂二(μL) |
100 |
100 |
混匀,37℃,10min |
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试剂三(μL) |
100 |
100 |
混匀,37℃,5min,对照管调零,1mL玻璃比色皿测定562nm处吸光值A1,测完后立即加入 试剂四 |
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试剂四(μL) |
300 |
300 |
混匀,37℃,5min,1mL玻璃比色皿,对照管调零,测定562nm 处吸光值A2。ΔA=A2-A1 |