微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
Hg2+是水体中重要有毒重金属离子,易被生物体吸收并且积累,能够通过食物链进一步传递,从而造成伤害。典型的水俣病就是汞中毒的一种。
测定原理:
水样经消化后,在酸性环境中,Hg2+能与二硫腙生成橙色络合物,溶于三氯甲烷,在490nm
测定吸光度,即可计算Hg2+含量。
自备仪器和用品:
恒温水浴锅、可调式移液枪、浓硫酸、三氯甲烷、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。加三氯甲烷(自备)35 mL 充分溶解。
标准品:液体×1 瓶,4 nmol/mL Hg 2+ ,室温保存。
水样中汞离子检测:
1. 消化
(1)水样消化:取1.5mL EP管,依次加入300μL水样,30μL浓硫酸(自备),240μL试剂一,混匀后盖紧,置于40℃水浴中消化24 h。
(2)标准品消化:取1.5mL EP管,依次加入30μL标准品,270μL蒸馏水,30μL浓硫酸,240μL试剂一,混匀后盖紧,置于40℃水浴中消化24 h。
2. 取出各管,室温放置约20min,使之冷却。然后加入48μL试剂二,盖紧后充分震荡,直到无色。开盖静置30min,期间摇荡数次,使其中气体溢出。
3. 加入300μL试剂五,加入60μL试剂四,充分震荡后静置分层。
4. 静置分层后,取移液枪,调节刻度到210μL,排气后沿管壁小心插入下层,吸取210μL下层液体,加入微量石英比色皿/96孔板,于490nm处比色,记录各管吸光值。
注意:标准管只需测定一次。