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可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
THL（EC 3.2.1.28）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。
测定原理：
采用 3.5－二硝基水杨酸法测定 THL 催化海藻糖产生的还原糖的含量。还原糖与 3.5－二硝基水杨酸共热生成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，由此判断 THL 活性的高低。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶 ，4℃保存，用时加入 2.5mL 试剂一；用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 20mL×1 瓶，常温保存；
样品测定的准备：
1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次）；8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织的处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g
组织，加入1mL提取液），冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建
议取 0.1mL 血清（浆）加入 1mL 提取液），冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95度。
3、加样表（在 EP管中依次加入下列试剂）：
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试剂名称（μL） |
对照管 |
测定管 |
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样本 |
180 |
180 |
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试剂一 |
300 |
220 |
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试剂二 |
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80 |
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37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴，准确反应 10min |
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试剂三 |
400 |
400 |
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试剂四 |
400 |
400 |
混匀，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失），冷却后，测定550nm 处测定管和对照管吸光值。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管均需设立一个对照管。