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紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
SDH（EC 1.1.1.14）催化山梨醇脱氢生成果糖，是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。
测定原理：
SDH催化山梨醇脱氢生成果糖，同时还原NAD+生成NADH，测定340nm吸光度增加速率可以计算SDH活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入15mL蒸馏水，用不完的试剂仍4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入15mL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
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试剂名称(μL) |
测定管 |
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试剂一 |
400 |
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试剂二 |
300 |
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试剂三 |
300 |
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混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确水浴 5min |
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样本 |
50 |
将上述试剂按顺序加1 mL玻璃比色皿中，加样本的同时开始计时，记录 20 秒时的初始吸光度A1和2分20秒时的吸光度A2，计算 ΔA=A2-A1。