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可见分光光度法
产品内容：
提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入3mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂二：液体30mL×1 瓶，4℃保存；
产品说明：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA 水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL
提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定（在1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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样本 |
100 |
100 |
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蒸馏水 |
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100 |
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试剂一 |
100 |
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充分混匀，放入37℃水浴60min。 |
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试剂二 |
600 |
600 |
充分混匀，沸水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，550nm 处记录各管吸光值A，
如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A 测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。