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可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
果胶酶（pectinase）是一类分解果胶质酶类的总称，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。
测定原理
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与 DNS 试剂反应生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取
1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，
加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 细胞培养液等：直接检测。
测定操作表
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对照管 |
测定管 |
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试剂一（µL） |
0.4 |
0.4 |
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50℃水浴温育 5min |
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样本（µL） |
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0.1 |
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煮沸样本（µL） |
0.1 |
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混匀，50℃水浴反应 30min |
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试剂二（µL） |
0.5 |
0.5 |
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沸水浴 5min，冰浴冷却终止反应，8000rpm，4℃，离心 10min，取上清，蒸馏水调零，1mL 玻璃比色皿测定 540nm 处吸光值 A，△A=A 测定管-A对照管。 |
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