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微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组
织等的能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。
测定原理：
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水
试剂的组成和配制：
试剂一：0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；
葡萄糖提取：
1、组织的处理：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），研磨成匀浆，冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。
2、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL蒸馏水），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次），95℃水浴10分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清液备用。
3、其他类液体，离心后可直接取上清检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
2、混合试剂的配制：使用前将试剂二和试剂三1:1等体积混合，用多少配多少。
3、加样表（在EP管或96孔板中加入下列试剂）：
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试剂（μL） |
空白管 |
标准管 |
测定管 |
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样本 |
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20 |
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试剂一 |
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20 |
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蒸馏水 |
20 |
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混合试剂 |
180 |
180 |
180 |
混匀，置 37℃（哺乳动物）或 25'C（其它物种）保温 15min 后，于 505nm 波长处读取吸光
度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为 A1、A2 和 A3。空白管和标准管只要做一管。