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微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。
测定原理：
本试剂盒采用 3.5－二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是 3.5－二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在
一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。
所需的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，4℃保存，用时加入1mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存一周；
试剂三：液体 3mL×1 瓶，常温保存；
样品测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 520nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：
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试剂名称（μL） |
对照管 |
测定管 |
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试剂一 |
15 |
15 |
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蒸馏水 |
15 |
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样本 |
30 |
30 |
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试剂二 |
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15 |
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置于 25℃准确水浴 10min |
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试剂三 |
30 |
30 |
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混匀， 95℃水浴 5min 左右（盖紧，防止水分散失），冷却至室温 |
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蒸馏水 |
210 |
210 |
混匀，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中测定各管 520nm 吸光值，ΔA=A 测定-A
对照，每个测定管需设一个对照管。