可见分光光度法
产品内容:
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体10mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体5mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体40mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:液体10mL×1瓶,4℃保存;
产品说明:
蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。SS(EC 2.4.1.13)催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。
SS催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水
操作步骤:
一、测定样品提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定操作表:
按下表操作:
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
30 |
30 |
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蒸馏水 |
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150 |
150 |
180 |
试剂一 |
150 |
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试剂二 |
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30 |
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混匀,25℃准确水浴10min |
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试剂三 |
50 |
50 |
50 |
50 |
沸水浴中煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),冷却 |
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试剂四 |
700 |
700 |
700 |
700 |
试剂五 |
200 |
200 |
200 |
200 |
混匀,沸水浴30min,冷却后,在480nm下测定各管吸光值。标准管和测定管只要做一管。每个测定管需要设定一个对照管。