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可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据适 pH，Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。
AI 的适 pH 为 3～5。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI（B-AI）两种类型。S-AI 主要存在于细胞液泡或自由空间中，适 pH 为 4.5~5.0（酸性），通过降解液泡中蔗糖，调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。
测定原理：
S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 510nm有特征光吸收，在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与 S-AI 活性成正比。
自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存;
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存;
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃
保存;
试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤和加样表：
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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样本 |
200 |
200 |
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试剂一 |
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800 |
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试剂二 |
800 |
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混匀， 37℃准确水浴 30min 后，95℃水浴 10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分 混匀（以保证浓度不变） |
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试剂三 |
500 |
500 |
混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，510nm 处，蒸馏水调零，记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A 测定-A 对照。