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可见分光光度法
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体50mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存。
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃保存。
产品简介：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据适 pH，将高等植物Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。NI主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
NI催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算NI活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤及加样表：
按下表操作：
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试剂名称（μL） |
测定管 |
标准管 |
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样本 |
200 |
200 |
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试剂一 |
/ |
800 |
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试剂二 |
800 |
/ |
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混匀，37℃准确水浴30min后，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变） |
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试剂三 |
500 |
500 |
混匀，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，510nm处蒸馏水调零，记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定-A对照。