上海酶科生物科技有限公司

可见分光光度法

测定意义

FFA 既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。血清中 FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、功能有关。

测定原理

FFA与铜离子结合形成脂肪酸铜盐，并溶于氯仿；利用铜试剂法测定铜离子含量，即可推算出游离脂肪酸含量。

自备仪器和用品

研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、一个 25 mL玻璃瓶、两个 10 mL 玻璃瓶、正庚烷、 无水甲醇、氯仿（三氯甲烷）、无水乙醇和蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一：液体×1 瓶，室温保存。

试剂二：自备。实验前1 d，取 25 mL 玻璃空瓶，加入12 mL 正庚烷，0.5 mL 无 水甲醇，12.5 mL 氯仿（自备），盖紧后混匀，室温保存。

试剂三：液体×1 瓶，室温保存。

试剂四：粉剂×1 支，4℃保存。临用前把试剂转移到 10 mL 玻璃瓶中，加入10 mL 无水乙醇，充分溶解。

标准品：粉剂×1 支，室温保存。临用前把试剂转移到 10 mL 玻璃瓶中，加入7.8 mL 氯仿充分溶解，即为500µmol/L 的棕榈酸标准溶液。

样品中FFA 提取

1、血液中 FFA 测定：将所取血液，室温静置 1 h 后，于 4 ℃ 离心机 3 500 rpm 离心 15min，取上层血清置于-20℃冰箱保存，待测。

2、组织中 FFA 含量测定：组织用生理盐水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，8000rpm，4℃，离心 10min，取上清液，待测。

3、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体(mL)为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声 2 秒，间隔 3秒，总时间 3min）；然后 8000rpm，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

测定

1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 550 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取带盖 玻璃试管，加入 10 µL 蒸馏水，500µL 试剂二，200 µL 试剂三，200µL试剂四，盖紧后充分震荡混匀（2min），倒入 1mL 玻璃比色皿，静置 15min，于 550nm 光吸收，记为 A 空白管。

3. 标准管：取带盖 玻璃试管，加入 10 µL 标准液，500µL 试剂二，200 µL 试剂三，200µL试剂四，盖紧后充分震荡混匀（2min），倒入 1mL 玻璃比色皿，静置 15min，于 550nm 光吸收，记为 A 标准管。

4. 测定管：取带盖 玻璃试管，加入10 µL上清液，500µL 试剂二，200 µL 试剂三，200µL试剂四，盖紧后充分震荡混匀（2min），倒入 1mL 玻璃比色皿，静置 15min，于 550nm 光吸收，记为 A 测定管。