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紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
产品内容：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5mL试剂二，充分溶解。
产品说明：
LOX广泛存在于植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。
LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在234nm处有特征吸收峰；测定234nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。
自备仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
二、测定：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到234 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A1和A2。
4. 测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A3和A4。
注意：空白管只需测定一次。