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可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
肝酯酶是脂肪分解酶，在肝实质细胞中合成，存在于肝脏窦周间隙内皮细胞表面和窦周间隙腔面的肝细胞微绒毛表面，可促进脂蛋白中的向类固醇激素转化，血浆中的 HL活性增高时，血浆中小颗粒可导致 LDL水平升高，加速动脉粥样硬化的发生。
测定原理
肝酯酶水解α-乙酸萘酯产生α-萘酚，可与固蓝B盐形成紫红色偶氮化合物，在595nm有特征吸收峰，颜色深浅在一定范围内与肝酯酶活性成正相关。
自备实验用品及仪器
天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿。
试剂组成和配制
试剂一：液体 75mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 20mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。
样品处理
1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心 10min，取上清待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议50万细胞加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于 4℃，10000g离心 10min，取上清待测。
3. 血清：直接测定。
测定操作
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对照管 |
测定管 |
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样品（μL） |
100 |
100 |
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试剂一（μL） |
450 |
400 |
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试剂二（μL） |
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50 |
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混匀，30℃水浴 10min |
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试剂三（μL） |
400 |
400 |
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试剂四（μL） |
50 |
50 |
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充分混匀，30℃静置 5min，于 1mL 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定 595nm处吸光值，记为 A对照管和 A 测定管，△A=A测定管- A对照管 |
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