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可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
TG是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。
测定原理：
用异丙醇抽提取TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，在420 nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与TG含量成正比。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1ml 玻璃比色皿、双蒸水
试剂组成和配置：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体×1 瓶，4℃ 避光保存。
试剂五：液体×1 瓶，4℃ 避光保存。
试剂六：液体×1 瓶，4℃ 避光保存。
标准品：液体×1 支，1mg/mL 标准甘油三酯溶液，4℃保存。
TG 的提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清待测。
2、细胞、细菌：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度 20％，超声 2s，停 1s），8000g，4℃离心 10min，取上清待测。
3、血清（浆）等液体样品：直接测定。
测定操作：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 420 nm，蒸馏水调零。
2．水浴锅预热到 65℃。
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空白管 |
标准管 |
测定管 |
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双蒸水（μl） |
100 |
/ |
/ |
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1mg/ml标准液（μl） |
/ |
100 |
/ |
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TG待测液（μl） |
/ |
/ |
100 |
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试剂一（μl） |
1250 |
1250 |
1250 |
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试剂二（μl） |
250 |
250 |
250 |
加试剂一后充分混匀，再加试剂二，剧烈振荡 30s，静置，待分层后取上层溶液 0.15mL，
置于新的 EP 管中。
3．甘油三酯含量测定：
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空白管 |
标准管 |
测定管 |
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上层溶液（μl） |
150 |
150 |
150 |
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试剂三（μl） |
500 |
500 |
500 |
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试剂四（μl） |
150 |
150 |
150 |
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充分混匀，65℃水浴3min |
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试剂五（μl） |
500 |
500 |
500 |
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试剂六（μl） |
500 |
500 |
500 |
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充分混匀，65℃水浴15min |
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取出EP管，待冷却后，于420nm 处比色，记为A空，A标和A测。
注意：空白管和标准管只需测定一次。