上海酶科生物科技有限公司

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

TC包括游离和酯。TC是指组织中所有脂蛋白所含之总和。

测定原理：

利用酯酶催化酯水解生成游离（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把酯转化为FC；进一步利用氧化酶催化FC氧化，生成△4-胆甾烯酮和H₂O₂；利用过氧化物酶催化H₂O₂氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在500nm有特征吸收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。

自备仪器和用品：

水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配置：

试剂一：异丙醇 100mL（自备）；

TC 工作液：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

TC 标准品：液体 1mL×1 支，5μmol/mL，4℃保存。

TC 的提取：

1、 组织中TC的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清，即TC待测液。

2、细胞、细菌中TC的提取：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），8000g 4℃离心10min，取上清，即TC待测液。

3、血清（浆）等样品：直接测定。

测定操作：

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到500nm，蒸馏水调零。

2. TC工作液置于37℃水浴30min。

3. 标准管：在在微量石英比色皿/96孔板中依次加入4μL TC标准品和196μL TC工作液，迅速混匀，5min后于500nm 处比色，记为A1。

4. 测定管：在在微量石英比色皿/96孔板中依次加入4μL TC待测液和 196μL TC工作液，

迅速混匀，5min 后于500nm 处比色，记为A2。

注意：标准管只需测定一次。