微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
淀粉是植物中糖的主要储存形式,其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。
测定原理:
利用80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖,采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量,即可计算淀粉含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 35mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;
淀粉提取:
1、称取0.1~0.2g样本(建议称取约 0.1g 样本)于研钵中研碎,加入1mL试剂一,充分匀
浆后转移到 EP 管中,80℃水浴提取 30min,3000g,25℃离心 5min,弃上清,留沉淀。
2、沉淀中加入0.5mL 蒸馏水,放入95℃水浴中糊化 15min(盖紧,以防止水分散失)。
3、冷却后,加入0.35mL试剂二,25℃常温提取15min,振荡3-5次。
4、加入0.85mL蒸馏水,混匀,3000g,25℃离心10min,取上清液待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95度。
3、工作液的配制:临用前在试剂三中加入3.75mL 蒸馏水后,缓慢加入21.25mL 浓硫酸,不断搅拌,充分溶解,待用;用不完的试剂 4℃保存一周;
4、样本测定:取50μL样本和250μL工作液至EP管中,95度水浴10 min(盖紧,防止水分散失),自然冷却至室温,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,在620 nm 波长下记录测定吸光度值A。