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活性测定试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体 ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
测定原理
AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体 30mL×1 瓶，4℃保存;
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；临用前加入250μL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍 4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入2mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍4℃
保存；
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入3mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍4℃保存；
试剂五：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入3mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入250μL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂七：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入250μL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存；
粗酶液制备
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤 ：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、试剂一置30℃保温10min以上。
3、在EP管中按顺序加入下列试剂（如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二、三和四按比例配成混合液 1，将试剂一、五、六和七按比例配成混合液 2）
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试剂名称（μL） |
测定管 |
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试剂一 |
100 |
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试剂二 |
10 |
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试剂三 |
50 |
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试剂四 |
100 |
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样本 |
20 |
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混匀，30℃保温 15 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却 |
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试剂一 |
300 |
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试剂五 |
100 |
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试剂六 |
10 |
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试剂七 |
10 |
混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算 ΔA=A2-A1。