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（Granule-bound starch synthase，GBSS）试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。
测定原理
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP +还原为 NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：液体 60mL×2 瓶，4℃保存；
液体一：7mL×2 瓶，4℃保存；
液体二：4mL×2 瓶，4℃保存；
液体三：8mL×2 瓶，4℃保存；
粉剂一：2 支，4℃保存；
粉剂二：2 支，4℃保存；
粉剂三：2 支，-20℃保存；
粉剂四：2 支，4℃保存；
粉剂五：2 支，4℃保存；
粉剂六：2 支，-20℃保存；
粉剂七：2 支，-20℃保存；
粉剂八：2 支，4℃保存；
粉剂九：2 支，4℃保存；
粉剂十：2 支，-20℃保存；
试剂一：液体×1 支，-20℃保存；临用前加入 500μL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 500μL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂 4℃保存；
反应液Ⅰ的配制：临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支，依次把粉剂一、粉剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。
反应液Ⅱ的配制：临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支，依次把粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。
反应液Ⅲ的配制：临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支，依次把粉剂八、粉剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。
粗酶液制备
称取0.1~0.2g 组织（建议称取约0.1g组织），加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
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试剂名称（μL） |
测定管 |
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样本 |
150 |
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反应液Ⅰ |
270 |
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混匀，30℃保温 20 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却 |
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反应液Ⅱ |
150 |
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混匀，30℃保温 30 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g 25℃离心 10min，取上清液 |
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上清液 |
450 |
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反应液Ⅲ |
300 |
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试剂一 |
10 |
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试剂二 |
10 |
混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。