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可见分光光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定SBE活性在淀粉生物合成、农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。
测定原理
淀粉和碘结合后在660nm有特征光吸收，SBE可切断支链淀粉侧支，从而降低了淀粉-碘复合物在660nm吸收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。
需自备的的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2 支，4℃保存；临用前每支加入 1mL 蒸馏水，充分溶解后备用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
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试剂名称（μL） |
对照管 |
测定管 |
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95℃水浴 1min 后灭活的粗酶液 |
250 |
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粗酶液 |
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250 |
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试剂一 |
320 |
320 |
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试剂二 |
30 |
30 |
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混匀，37℃准确保温 20 min，95℃水浴 1 min（盖紧防止水分散失），冷却 |
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试剂三 |
500 |
500 |
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试剂四 |
40 |
40 |
混匀，室温静置10min，用蒸馏水调零，660nm处读取各管吸光值。
注意：
1、可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行1min 95℃水浴处理。
2、试剂一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。