点击图片查看原图
(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GAPDH 催化3-磷醛氧化生成 1,3-二磷酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理
3-磷酸激酶催化三磷酸和 ATP 生成 1,3 二磷酸。GAPDH 逆向催化 1,3二磷酸和 NADH 生成 3 磷醛、无机磷和 NAD，340nm 处测定 NADH 的减少量可反映 GADPH 活性的高低。
需自备的仪器和用品
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体×1 支，4℃保存；
样本的前处理
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或 25℃(其
它物种)预热10分钟；现配现用。
（2）在试剂三中加入1mL蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂 4℃保存一周。
（3）在1mL石英比色皿中加入30μL样本、20μL试剂三和950μL工作液，混匀，加入一个试剂的同时开始计时，记录340nm处20s时的吸光值A1和5min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。