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微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理
乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液：液体 110mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用前加入 0.6mL 蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 6mL 蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1 支，4℃避光保存。
标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。
显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1：
0.3：3：15（mg）的比例充分混匀。
样本处理
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g 离心10min，取上清测定。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于 4℃，12000g 离心10min，取上清测定。
3. 血清：直接测定。
测定操作
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空白管 |
样品对照管 |
样品测定管 |
标准对照管 |
标准测定管 |
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样品（μL） |
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10 |
10 |
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标准品（μL） |
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10 |
10 |
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H2O（μL） |
100 |
60 |
90 |
60 |
90 |
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试剂一（μL） |
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30 |
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30 |
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试剂二（μL） |
40 |
40 |
40 |
40 |
40 |
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显色液（μL） |
60 |
60 |
60 |
60 |
60 |
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充分混匀，于 37℃反应 30min，于微量石英比色皿/96孔板，空白管调零，测定530nm处吸 光值，分别记为 A1，A2，A3，A4，△A 样=A2-A1；△A 标= A4-A3 |
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注意：空白管、标准对照管和标准测定管只需测定一次