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可见分光光度法
产品内容：
试剂一：50mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：10mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：1mL×1支，-20℃保存；
试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1支，4℃保存，临用前加入2mL蒸馏水，用不完的试剂仍4℃保存；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入2mL蒸馏水，用不完的试剂4℃保存。
产品说明：
SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。
此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm 处具有特征吸收峰，通过600nm 吸光度的变化，测定2．6-DPIP 的还原速度，代表SDH 酶活性。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 称取约0.1g 组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆600g，4℃离心5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的SDH（此步可选做）。在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体SDH 活性测定。
二、测定步骤和加样表
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试剂名称（μL） |
测定管 |
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试剂四 |
60 |
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试剂五 |
30 |
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蒸馏水 |
800 |
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37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）保温10min 左右。 |
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样本 |
30 |
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试剂六 |
30 |
用蒸馏水调零后，依次加各试剂到1 mL玻璃比色皿中，在加入试剂六的同时开始计时，混匀，在600 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和1分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。