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紫外分光光度法
产品内容：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1支，-20℃保存。临用前加入250μL试剂五充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂三：液体×1支，4℃保存。临用前加入250μL试剂五充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加入22.5mL试剂五充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂五：液体×1瓶，4℃保存。
工作液的配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.92 m L），将试剂二、三和四按照1:1:90的比例混合，或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀（可以测定24样）；加样前置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴锅中预热30 min；用不完的试剂4℃保存一周；
产品说明：
乙酰辅酶A 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A 汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于ATP 合成。此外，乙酰辅酶A 是合成脂肪酸，酮体，及其衍生物等生理活性物质的前体物质。
苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD 生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶A含量和NADH 的生成速率成正比，340nm 下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A 含量的高低。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、乙酰辅酶A的提取
1、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min，用蒸馏水于340nm处调零。
2、 取920μL工作液和100μL样本至1mL石英比色皿，混匀，立即记录340nm处20s的吸光值A1 和80s时的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。