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可见分光光度法
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容：
提取液：液体30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体50 mL×1 瓶，4℃保存；
产品说明：
GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT 活性很高，当肝细胞坏死，GPT 释放到血液中，血清GPT 活性显著增高。因此，GPT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害敏感的检测指标。
GPT 催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm 读取吸光值并计算酶活力。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品测定的准备
1、 细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、 血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
2、 在EP 管中加入下列试剂
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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待测样本 |
20 |
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试剂一 |
100 |
100 |
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混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热30min |
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试剂二 |
100 |
100 |
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待测样本 |
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20 |
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混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴20min |
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试剂三 |
1000 |
1000 |
混匀，室温放置10min，在505nm 波长处，测各管吸光度。每个测定管需设一个对照管。