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可见分光光度法
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容：
提取液：液体30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体5mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：液体5mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂三：液体50 mL×1 瓶，4℃保存；
产品说明：
GOT（ 2.6.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化可逆转氨基反应，是氨基酸代谢的重要酶。此外，GOT 在心肌细胞中含量，临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。
GOT 催化α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸；丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色；测定505nm 吸光度的变化，即可计算GOT 酶活力。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品测定的准备
1、 细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、 血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
2、 在EP 管中加入下列试剂
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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待测样本 |
20 |
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试剂一 |
100 |
100 |
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混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热30min |
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试剂二 |
100 |
100 |
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待测样本 |
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20 |
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混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴20min |
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试剂三 |
1000 |
1000 |
混匀，室温放置10min，在505nm 波长处，测各管吸光度。每个测定管需设一个对照管。