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可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和 Cys。其中，Cys 是一种含有巯基的含硫氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形
成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
测定原理：
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝，在 600nm 处有吸收峰；通过 600nm 吸光度，计算 Cys 含量。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、磷酸和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前1天，向试剂三中加5 mL蒸馏水充分溶解，再加磷酸1.25mL，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴2h；冷却后加20mL 蒸馏水，4 ℃可保存2周。
标准品：液体×1 瓶，1μmol/mL 标准液，4℃保存。
半胱氨酸提取：
1、 液体样品中半胱氨酸提取：取0.1mL液体样品，加试剂一0.9mL，充分混匀，8000g 4℃离心10min，取上清液，待测。
2、 组织中半胱氨酸提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称
取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10 min，取上清液待测。
3、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定操作：
1. 分光光度计预热30min，调节波长到600nm，蒸馏水调零。
2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入100μL蒸馏水，500μL试剂二，500μL试剂三混匀
后室温静置15min，于600nm 处测定吸光值，记为 A 空白管。
3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入100μL 标准液，500μL试剂二，500μL试剂三，混匀后室温静置 15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 标准管。
4. 测定管：取 1mL玻璃比色皿，加入100μL上清液，500μL试剂二，500μL试剂三，混匀后室温静置15min，于600nm处测定吸光值，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需要做一次。