点击图片查看原图
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
测定原理：
在酸性环境中，ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与4-氨基安替和铁反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1 瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。
标准品：液体×1 支，2μmol/mL 酚标准液，4℃保存。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g 离心10min，取上清液待测。
2. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
测定：
1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到510nm ,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。
4. 标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm 测定吸光度，记为A标准管。
5. 对照管：取EP管，加入40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀；加入4μL上清液，混匀后于510nm测定吸光度，记为A对照管。
6. 测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm 测定吸光度，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需做一次。