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可见分光光度法
产品内容：
试剂一：25mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：5mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：0.5 mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂四：液体10mL×2 瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×2 支，-20℃保存；
试剂六：粉剂×2 支，-20℃保存；
产品说明：
线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C 氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C 的氧化，并终把电子传递给氧，生成水。还原型细胞色素C 在550nm 有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C 生成氧化型细胞色素C，因此550nm 光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
正式实验前务必取2-3个预期差异较大的样本做与测定。
一、样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 准确称取0.1g 组织或收集500 万细菌或细胞，加入1mL 试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆600g，4℃离心5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11100g，4℃离心10min。
4、 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做）。
5、 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200uL 试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10 秒，重复30 次），用于复合体Ⅳ酶活性测定。
二、测定步骤：
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1） 工作液的配制：临用前取试剂四、试剂五、试剂六各一支，将试剂五和试剂六依次转移到试剂四中混合溶解。分批配制工作液是为了防止当天不能测完，导致工作液失效。
（2） 将工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂4℃可保存一周；
（3） 在1mL 玻璃比色皿中加入40μL 样本和800μL 工作液，立即混匀，记录550nm 处初始吸光值A1 和 1min 后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
注意：若ΔA 大于0.2，需将样本用试剂二稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数），使A1-A2 小于0.2，可提高检测灵敏度。