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分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
亚硝酸盐广泛存在于水体和土壤中，不仅是氮分解的重要中间产物，也可能来自污染。人体摄入过量后，可诱发消化系统癌变。
测定原理
在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与 N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，室温保存。
试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
样品处理
1. 土壤样品：准确称取过筛后的土壤约1g，加入2mL提取液，室温震荡1h，8000g，25℃离心 15min，静置，待其分层后，取上清液待测。
2. 水样：直接检测；如果浑浊，可以离心后再测定。
测定步骤和操作表
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空白管 |
测定管 |
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样品（µL） |
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1000 |
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试剂一（µL） |
500 |
500 |
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试剂二（µL） |
500 |
500 |
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H2O |
1000 |
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混匀，25℃静置 15min，1mL 玻璃比色皿，空白管调零，测定 A 540 |
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注意：空白管只需测定一次。
注意事项
1. 试剂盒 2-8℃保存。
2. 试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。
3. 检出限为 1.97μ moL /L。