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可见分光光度法
产品内容：
提取液：30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：10mL×1 瓶，-20℃保存。
试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存。
试剂三：粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入5mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂四：10mL×1 瓶，4℃保存。
产品说明：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。
GS在ATP和Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在540nm处有吸收峰，可用分光光度计测定。
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本测定的准备
1、 细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、 血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、 在EP 管中加入下列试剂：
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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试剂一 |
320 |
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试剂二 |
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320 |
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试剂三 |
140 |
140 |
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样本 |
140 |
140 |
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混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）准确水浴30min |
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试剂四 |
200 |
200 |
混匀，静置10min后，5000g，常温离心10min，取上清液测定540nm 处的吸光值A。△A=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。