上海酶科生物科技有限公司

还原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样 本做预测定。 

产品内容： 

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。 

试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。 

试剂三：液体×1 瓶，4℃避光保存。 

产品说明： 

GSH是细胞内主要的巯基物质，在、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG 比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。 

DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度与GSH 含量成正比。 

自备仪器和用品： 

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。 

操作步骤：

一、粗酶液提取： 

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。 

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。 

3. 血清等液体：直接测定。 

二、GSH 测定操作： 

1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。 

2. 试剂二置于 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴中保温 30min。

3. 空白管：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 100μL 蒸馏水，700μL 试剂二，200μL 试剂三，混匀静置 2min 后测定 412 nm 吸光度 A1。 

4. 测定管：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 100μL 上清液，700μL 试剂二，200μL 试剂三，混匀静置 2min 后测定 412 nm 吸光度 A2。