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紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化AsA所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素 b还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。
测定原理：
AAO可直接氧化 AsA，通过测定AsA的氧化量，可计算得AAO活力。
实验中所需仪器及设备：
低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
AAO 测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3. 依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、850μL预热的试剂二和50μL试剂三，迅
速混匀后在265nm 测定10s和130s光吸收A1和A2，△A =A1-A2。