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可见分光光度法
正式测定前取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
H2O2是生物体内常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面 H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。
测定原理：
H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、丙酮 60mL、浓盐酸 10mL、
研钵和冰。
试剂的组成和配制：
试剂一：丙酮 60mL×1 瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入10mL浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃
保存；(溶解时间较长，约30min，务必提前准备)
试剂三：15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：60mL×1 瓶，4℃保存；
H2O2 提取：
1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；用试剂一定容至1mL；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织样品的制备：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆；转移至 EP 管中，用试剂一定容至1mL，8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤 ：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二、三和四 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴10min 以上。
3、在 EP 管中按顺序加入下列试剂
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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样本 |
吸取的量的为全部上清液 |
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试剂一 |
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1000 |
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试剂二 |
100 |
100 |
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试剂三 |
200 |
200 |
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4000g，25℃离心 10min，弃上清，留沉淀 |
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试剂四 |
1000 |
1000 |
加入试剂四溶解沉淀后，室温静置 5min，倒入比色皿中，测定415nm处吸光值 A。对照管只要做一次即可。计算 ΔA＝A测定-A对照。
注意事项：
1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。
2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。