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可见分光光度法
产品简介：
PPO主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在525nm有特征光吸收。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容：
提取液：液体，60ml×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体，40ml×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体，10ml×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体，20ml×1瓶，4℃保存
操作步骤：
一、 粗酶液提取：
1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μl提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2、称取约0.2g组织，加入1ml提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定操作表：
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试剂名称（μl） |
测定管 |
对照管 |
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试剂一 |
600 |
600 |
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试剂二 |
150 |
150 |
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样本 |
150 |
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煮沸的样本 |
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150 |
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37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，迅速放入冰浴中冷却 |
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试剂三 |
300 |
300 |
充分混匀，5000g，常温离心10min，收集上清，用蒸馏水调零，525nm处检测测定管和对照管吸光度。
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行1min沸水浴处理