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可见分光光度法
测定意义：
SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子 发生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是 H2O2 主要生成 酶，在生物系统中具有重要作用。
测定原理：
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.)，O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在 560nm 处有吸收；SOD 可清除 O2-.，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深， 说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存，用时加入27ml蒸馏水，充分摇匀悬浊液；
试剂三：液体 175μL×1 支，4℃保存；(与蒸馏水1：1稀释后再使用)
试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和四 37℃（哺乳动物）25℃（其他物种）水浴 5min 以上。
3、样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）：
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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试剂一 |
240 |
240 |
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试剂二 |
510 |
510 |
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试剂三 |
6 |
6 |
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样本 |
90 |
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试剂四 |
180 |
180 |
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蒸馏水 |
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90 |
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充分混匀，室温静置 30min 后，加入 1mL 玻璃比色皿，560nm 处测定各管吸光值 A。
注意事项：
1、试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。