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可见分光光度法
试剂的组成：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体×2瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL试剂一；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂三：液体10 mL×1瓶，4℃保存。
测定意义：
POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
操作步骤：
一、 粗酶液提取：
1、 细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、 血清（浆）样品：直接检测。
二、 测定步骤和加样表：
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试剂名称（µL） |
测定孔 |
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样本 |
15 |
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蒸馏水 |
270 |
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试剂一 |
520 |
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试剂二 |
130 |
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试剂三 |
135 |
测定前将试剂一、二和三37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min。在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
注意：
1. 若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上，测定时加入15µL样本和1055µL混合液测定。
2. 如果ΔA小于0.005，可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5，可将样本用提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。