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微量法
注意：正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体3mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品能力的重要指标之一，在类和药品研究中得到广泛应用。
H2O2/ Fe2+通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+ ，导致536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
操作步骤：
一、样品的制备：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。
3. 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。
二、操作步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至536nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
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空白管 |
对照管 |
测定管 |
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试剂一（μL） |
30 |
30 |
30 |
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试剂二（μL） |
80 |
80 |
80 |
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试剂三（μL） |
20 |
20 |
20 |
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立即混匀，防止局部颜色过浓 |
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样品（μL） |
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50 |
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试剂四（μL） |
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20 |
20 |
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H2O（μL） |
70 |
50 |
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混匀37℃，60min，于微量石英比色皿/96孔板中测定536nm处吸光值，空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为A空、A对和A测。 |
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注意：空白管和标准管只需测定一次。