可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
UA 是鸟类和爬行类动物的主要代谢产物,正常人体尿液中产物主要为尿素,含少量尿酸。此外,UA 还是重要的剂,能清除超氧化物,羟自由基等。体内 UA 生成量和排泄量不平衡会导致多种疾病的发生。例如,血中 UA 升高会引起痛风、肾功能损害和,相反 UA 降低会引起恶性,在临床诊断上具有重要的意义。
测定原理
尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素,CO2 及H2O2 ,H2O2 氧化亚铁中的Fe2+生成Fe3+,Fe3+进一步与酚和4-氨基安替比林缩合生成红色醌类化合物,在505nm下有特征吸收峰,测定反应体系505nm 的吸收值,可计算尿酸的含量。
自备实验用品及仪器
恒温水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
缓冲液:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:
A. 用于标准管和测定管,粉剂 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 10mL 缓冲液溶解。
B. 用于空白管,粉剂 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 5mL 缓冲液溶解。
试剂二:粉剂 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 10mL 双蒸水水置于 60℃加热溶解。
测定操作表
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标准管 |
空白管 |
测定管 |
试剂一(μL) |
A, 200 |
B, 200 |
A, 200 |
H2O(μL) |
600 |
800 |
600 |
试剂二(μL) |
200 |
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样品(μL) |
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200 |
混匀,37℃水浴 30min,于 1mL 玻璃比色皿,空白管调零,分别测定标准管和测定管 A505 。 |
注意:空白管和标准管只需测定一次。