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紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容：
提取液：液体60mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂1 瓶，4℃避光保存，使用前加15mL 蒸馏水溶解。
试剂二：液体15mL×1 瓶，4℃保存。
工作液：临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1 混合。使用前37℃温育2min。
产品说明：
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与ATP 之间的转磷酰基反应，在能量运转、肌肉收缩和ATP 再生中有重要作用，是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。 CK 催化磷酸肌酸和ADP 生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP 与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖， 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致340nm 光吸收值增加。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤：
一、 粗酶液提取
1. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2. 血清样本：直接测定。
二、 测定操作表
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空白管 |
测定管 |
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酶液（μ L） |
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200 |
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工作液（μ L） |
500 |
500 |
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H2O（μ L） |
500 |
300 |
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混匀，于1mL 石英比色皿，对照管调零，测定340nm 的初始值A1，测定完立即放入37℃水浴，准确计时，分别测定1min，2min，3min 时的吸光值A2，计算时取平均值，△A= A2-A1。 |
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注意：空白管只需测定一次。