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微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
甜菜碱是一种广泛分布于动植物及微生物体内的季铵型水溶性生物碱，是生物体内胆碱的氧化产物，可以、、、抗，并可作为甲基供体，参与促进动物蛋
白质和脂肪代谢、增进食欲、缓和应激、调节渗透压、稳定维生素等多种生物作用，在化工、
医药、食品添加剂等领域有较广泛的应用。
测定原理
甜菜碱在强酸条件下和雷氏盐发生反应产生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成红色溶液，在 525nm处有特征吸收峰，测定525nm处的吸光值，可计算得样品的甜菜碱含量。
自备实验用品及仪器
天平、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、甲醇、乙醚、盐酸和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液（自备）：80%甲醇。取80mL甲醇，加20mL蒸馏水。
标准品：粉剂 1mg×2 支，4℃保存，临用前加1mL蒸馏水充分溶解。
试剂一：粉剂 0.12g×2 瓶，4℃保存，临用前根据用量配制，每瓶加4mL蒸馏水溶解，加78μL浓盐酸调 pH为1。
试剂二：99%乙醚，自备。取无水乙醚5.94mL ，加入蒸馏水0.06mL ，混匀。
试剂三：70%丙酮，（ 易挥发，根据用量自备，丙酮：蒸馏水=7:3）。
甜菜碱提取
取烘干后过40目筛的样品约0.2g，加1mL提取液，置于60℃提取30min，期间不断震荡。10000g，25℃，离心15min，取上清液。
测定操作表
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至525nm。
2、操作表
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标准管 |
测定管 |
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上清液（µL） |
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50 |
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标准品（µL） |
50 |
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试剂一（µL） |
70 |
70 |
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充分混匀，4℃中反应 2h，8000rpm，25℃，离心 15min，弃上清 |
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试剂二（µL） |
60 |
60 |
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8000rpm，25℃，离心 10min，置于通风橱使试剂二自然挥发干净 |
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试剂三（µL） |
200 |
200 |
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震荡使沉淀充分溶解，取200µL于微量石英比色皿/96孔板，试剂三调零，记录标准管和测定管525nm处吸光值A525。 |
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注意：标准管只需测定一次。