紫外分光光度法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
提取液一:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体35mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加10mL双蒸水充分溶解。(配好后3天内使用完)
试剂三:液体5mL×1瓶,4℃保存。
产品说明:
乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.15)是植物光呼吸代谢中的关键酶,也是光下合成草酸的关键酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙,在324nm 有特征吸收峰。
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。
操作步骤:
一、酶液提取
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g, 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定操作
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测定管 |
样本(μL) |
50 |
试剂一(μL) |
650 |
试剂二(μL) |
200 |
试剂三(μL) |
100 |
充分混匀,立即于1mL 石英比色皿中测定324nm 处10s和190s 吸光值A1 和A2,△A=A2- A1 |