点击图片查看原图
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，即原果胶。因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用，在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
测定原理
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在530nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、浓硫酸和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
提取液二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。
试剂一：浓硫酸，自备。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
样品处理
将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为1: 20的比列（建议取约 0.05g 样品，加入1mL提取液一），置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min，取出冷却后于 5000g、 25℃离心10min，去掉上清，沉淀中再加入 1mL 提取液一重复操作一次，离心后去上清，沉淀中加入1mL提取液二，置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h，取出冷却后于 8000g、25℃离心15min，取上清液待测。
测定操作表
|
|
空白管 |
标准管 |
对照管 |
测定管 |
|
样本（μL） |
|
|
100 |
100 |
|
标准品（μL） |
|
100 |
|
|
|
浓硫酸（μL） |
600 |
600 |
600 |
600 |
|
混匀、90℃放置 10min，取出后冷却 |
||||
|
试剂二（μL） |
|
|
100 |
|
|
试剂三（μL） |
100 |
100 |
|
100 |
|
混匀，25℃静置 30min |
||||
|
蒸馏水（μL） |
300 |
200 |
200 |
200 |
|
充分混匀，置于 1mL 玻璃比色皿中，测定 530nm 处吸光值，分别记为 A1、A2、A3 和 A4。 △A1=A2-A1，△A2=A4-A3 |
||||
注意：空白管和标准管只需测定一次。