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试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
果糖-1,6-二磷酸酶又称果糖 1,6-二磷酸酯酶，催化 1,6-二磷酸果糖和水生成6-磷酸果糖和无机磷，在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。
测定原理
FBP催化 1,6-二磷酸果糖和水生成 6-磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算FBP活性。
需自备的仪器和用品
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入20mL试剂四充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂二：液体×1 支，4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；
样本的前处理
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、将试剂一、二、三 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热10分钟。
3、加样表：
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试剂名称（μL） |
测定管 |
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样本 |
20 |
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试剂二 |
10 |
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试剂三 |
10 |
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试剂一 |
160 |
将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿或96孔板中，立即混匀，加入一个试剂的同时开始计时，在340nm波长下记录反应1min后吸光度A1和反应 6min 后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。