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分光光度法
产品内容：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体47 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体×1 支，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存；
产品说明：
丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase，PC，EC 6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中，催化丙酮酸、ATP、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和Pi，是糖异生过程的个限速酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
PC催化丙酮酸、ATP、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和Pi，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH 生成苹果酸和NAD+，在340nm下测定NADH 氧化速率，即可反映PC 活性。
需自备的仪器和用品：
分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、 样本的前处理
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 称取约0.1g 组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆600g，4℃离心5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的PC（此步可选做）。
5、 在步骤④的沉淀中加入1mL提取液，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体PC活性测定。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂四的配制：在试剂四瓶中加入2.5mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周；
3、 在1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂四和900μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算A=A1-A2。
注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.5，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.5 可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。